Ofloxacin je baktericidní antibiotikum ze skupiny fluorovaných chinolonů.
Hlavním mechanismem účinku chinolonů je specifická inhibice bakteriální DNA-gyrázy. Tento enzym je nezbytný pro replikaci, transkripci, opravy a rekombinaci DNA. Jeho inhibice vede k otevření a destabilizaci bakteriální DNA a v důsledku toho k rozpadu buňky.
Zdá se, že jisté chinolony, včetně ofloxacinu, mají účinek na bakteriální buňky nezávislý na RNA, což baktericidní účinnost zvyšuje. Mechanismus tohoto druhého účinky nebyl dosud objasněn.