Akutní toxicita Po per os podání 10% suspenze isosorbid-mononitrátu v dávce od 1 500 do 3 500 mg/kg byla zjištěna LD50 u myší–samců 2 650 mg/kg a u myší–samic 2 510 mg/kg. U potkanů–samců LD50 = 1 690 mg/kg a u potkanů–samic LD50 = 2 100 mg/kg.
Mutagenní účinek Byl stanovován modifikovanou metodou podle Amese na histidin auxotrofních kmenů Salmonella typhimurium TA 97a, TA 98 a TA 100. Z výsledků provedeného testu vyplývá, že nebyl nalezen mutagenní účinek isosorbid-mononitrátu. Mikronukleus test byl proveden metodou dle W. Schmida na bílých myších ICR obojího pohlaví po jednorázovém perorálním podání isosorbid-mononitrátu v dávkách 5,25 a 100 mg/kg tělesné hmotnosti. Testovaná látka nevyvolala zvýšení frekvence polychromatofilních erytrocytů s mikrojádry v kostní dřeni femurů myší, ve srovnání s negativní kontrolou, tj. aqua pro ing. Látku je tedy možno v daném systému považovat za nemutagenní.
Embryotoxický účinek Byl sledován na kuřecím zárodku v testech CHEST I a CHEST II. Embryotoxický efekt isosorbid-mononitrátu nastupuje v intervalu dávek 1–10 mikrogramů, kde překračuje hladinu účinků nespecifických faktorů pokusného uspořádání. Nejvyšší efekt má aplikace druhý den. Látka je tedy obecně cytotoxická.