Metabolismus letrozolu je částečně zprostředkován enzymy CYPA6 a CYP3A4. Cimetidin, slabý nespecifický inhibitor enzymů CYP450, neovlivňuje koncentrace letrozolu v plazmě. Vliv potenciálních inhibitorů CYP450 není znám.
Dosud nejsou klinické zkušenosti s podáváním letrozolu v kombinaci s estrogeny nebo dalšími protinádorovými přípravky jinými než tamoxifen. Tamoxifen, další antiestrogeny nebo přípravky obsahující estrogen mohou snižovat farmakologický účinek letrozolu. Navíc souběžné užívání tamoxifenu s letrozolem vedlo ke značnému snížení koncentrace letrozolu v plazmě. Letrozol se nemá podávat společně s tamoxifenem, dalšími antiestrogeny nebo estrogeny.
Letrozol in vitro inhibuje izoenzym 2A6 cytochromu P450 a mírně inhibuje izoenzym 2C19, ale klinický význam není známý. Proto je nutné věnovat zvláštní opatrnost současnému podávání letrozolu s léčivými přípravky, jejichž eliminace je závislá především na těchto izoenzymech a jejichž terapeutický index je úzký (např. fenytoin, klopidogrel).